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Las terapias actuales de cancer de prostata son cirugia por ejemplo, prostatectomia radicalradioterapia incluyendo braquiterapia y terapia de radiation de haz externo, ultrasonido focalizado de alta intensidad HIFUquimioterapia, farmacos quimioterapeuticos orales, criocirugia congelation del tumorterapia hormonal tal como terapia antiandrogenoscastration o combinaciones de las anteriores.

La mayoria de estas terapias cirugia y radioterapia externa son, sin valores del agente prostático 442 2, solamente o principalmente utiles para el tratamiento de tumores primarios y metastasis grandes. Son por tanto necesarias modalidades de tratamiento distintas o complementarias para conseguir valores del agente prostático 442 2 considerables de las enfermedades malignas diseminadas, particularmente en casos de micrometastasis.

La terapia, tal como inmunoterapia o radioinmunoterapia, usando moleculas de direction tales como anticuerpos y fragmentos podria proporcionar la posibilidad de terapia de enfermedad diseminada. Por lo tanto, existe la necesidad de nuevos agentes y metodos terapeuticos para tratar cancer de prostata, particularmente en casos de enfermedad diseminada, metastasis para la prostata de soja leche micrometastasis.

En consecuencia, la presente invencion busca mitigar, aliviar o eliminar una o mas de las deficiencias anteriormente identificadas en la tecnica y desventajas individualmente o en cualquier combinacion y resuelve al menos los problemas mencionados anteriormente proporcionando un metodo de terapia de acuerdo con las reivindicaciones de patente adjuntas.

En un primer aspecto, la presente invencion proporciona un agente que comprende o consiste en a un anticuerpo o un fragmento de union a antigeno del mismo con especificidad por proteina kalicrema humana hK2 y b un resto citotoxico para Dietas rapidas en el tratamiento de cancer de prostata. Dicho de otro modo, el primer aspecto de la presente invencion se refiere al uso de un agente como se ha descrito anteriormente en la fabricacion valores del agente prostático 442 2 un medicamento para el tratamiento de cancer de prostata.

En consecuencia, el primer aspecto tambien proporciona un metodo para el tratamiento de cancer de prostata en un paciente, comprendiendo el metodo la etapa de administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de un agente como se ha descrito anteriormente.

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Por lo tanto, los agentes de la presente invencion comprenden un resto de union en forma de un anticuerpo anti-hK2 o un fragmento de union a antigeno del mismo. La afinidad de union de los diferentes derivados de anticuerpo mencionados anteriormente puede determinarse con el metodo de Scatchard usando una concentracion fija de fragmento de anticuerpo inmovilizado y diversas concentraciones de indicador de Eu-PSA.

MÉTODOS: Revisamos en la literatura el valor del PSA como marcador para definir clave, previamente un grupo japonés en (2) descubre la proteína en.

Como alternativa, la afinidad de union puede determinarse usando tecnologia de resonancia de Plasmon Superficial RPS en un instrumento Biacore. Los metodos de analisis se describen adicionalmente en el Ejemplo 8.

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En valores del agente prostático 442 2, el fragmento de union a antigeno se selecciona del grupo que consiste en fragmentos Fv por ejemplo, Fv monocatenario y Fv con enlaces disulfurofragmentos de tipo Fab por ejemplo, fragmentos Fab, fragmentos Fab' y fragmentos F ab 2dominios variables individuales por ejemplo, dominios Vh y Vl y anticuerpos de dominios dAb, incluyendo formatos individuales y dobles [es decir, dAb-enlazador-dAb].

Las ventajas de usar fragmentos de anticuerpo, en lugar de anticuerpos completos, son multiples. Ademas, pueden expresarse fragmentos de union a antigeno tales como fragmentos de anticuerpo Fab, Fv, ScFv y dAb en y secretarse de microorganismos, tales como E.

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Tambien se incluyen dentro del alcance de la invencion versiones modificadas de anticuerpos y fragmentos de union a antigeno de los mismos, por ejemplo, modificados por la union covalente de polietilenglicol u otro polimero adecuado vease posteriormente. Se conocen bien en la tecnica metodos para generar anticuerpos y fragmentos de anticuerpo. Por ejemplo, pueden generarse anticuerpos mediante uno cualquiera de varios metodos que emplean induccion de produccion in vivo de moleculas de anticuerpo, exploracion de bibliotecas de inmunoglobulina Orlandi.

Estos incluyen, pero sin limitation, la tecnica de hibridoma, la tecnica de hibridoma de linfocitos B humanos, y la tecnica de hibridoma de virus de Epstein-Barr VEB Kohler et valores del agente prostático 442 2. Nature ; Kozbor et al.

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Methods ; Cote et al. USA ; Cole et al. Por ejemplo, pueden prepararse fragmentos de anticuerpo de acuerdo con la presente invencion mediante hidrolisis proteolitica del anticuerpo o mediante expresion en celulas de E.

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Como alternativa, pueden obtenerse fragmentos de anticuerpo mediante digestion con pepsina o papaina de anticuerpos completos por metodos convencionales. Se apreciara por expertos en la materia que para terapia humana o diagnostico, pueden usarse anticuerpos humanos o humanizados.

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Son formas humanizadas de anticuerpos valores del agente prostático 442 2 humanos por ejemplo, murino anticuerpos quimericos modificados por ingenieria genetica o fragmentos de anticuerpo que tienen partes minimas derivadas de anticuerpos no humanos.

Los anticuerpos humanizados incluyen anticuerpos en los que se reemplazan regiones determinantes de complementariedad de un anticuerpo humano anticuerpo receptor por restos de una region determinante de complementariedad de una especie no humana anticuerpo donante tal como raton, rata o conejo que tiene la funcionalidad deseada. En algunos casos, se reemplazan restos de marco conservado de Fv del anticuerpo humano por restos no humanos correspondientes.

Los anticuerpos humanizados tambien pueden comprender restos que no se encuentran ni en el anticuerpo receptor ni en las secuencias marco conservadas o de region determinante de complementariedad importadas.

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En general, el anticuerpo humanizado comprendera sustancialmente todos de al menos uno, y normalmente valores del agente prostático 442 2, dominios variables, en los que todas o sustancialmente todas las regiones determinantes de complementariedad corresponden a las de un anticuerpo no humano y todas, o sustancialmente todas, la regiones marco conservadas corresponden a las de una secuencia consenso humana relevante.

Los anticuerpos humanizados optimamente tambien incluyen al menos una parte de una region constante de anticuerpo, tal como una region Fc, normalmente derivada de un anticuerpo humano vease, por ejemplo, Jones et al. Nature ; Riechmann et al.

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  3. La presente invencion se refiere en general al campo de los agentes y los metodos terapeuticos, particularmente en el campo del cancer de prostata. La enumeracion o el analisis en la presente memoria descriptiva de un documento aparentemente publicado con anterioridad no deberian tomarse necesariamente como un reconocimiento de que el documento es valores del agente prostático 442 2 del estado de la tecnica o es conocimiento general comun.
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Se conocen bien en la tecnica metodos para humanizar anticuerpos no humanos. En general, el anticuerpo humanizado tiene uno o mas restos de aminoacidos introducidos en el de una fuente que no es humana.

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Estos restos de aminoacidos no humanos, con frecuencia denominados restos importados, se toman normalmente de un dominio variable importado. La humanizacion puede realizarse esencialmente como se ha descrito vease, por ejemplo, Jones et al. Nature ; Verhoeyen et al.

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En consecuencia, dichos anticuerpos humanizados son anticuerpos quimericos, en los que sustancialmente menos que un dominio variable humano intacto se ha sustituido por la secuencia correspondiente de una especie no humana. En la practica, los anticuerpos humanizados pueden ser normalmente anticuerpos humanos en los que algunos restos de region determinante de complementariedad y posiblemente algunos restos marco conservados se sustituyen por restos de sitios analogos en anticuerpos de roedor.

Los anticuerpos humanos tambien pueden identificarse usando diversas tecnicas conocidas en este campo, incluyendo bibliotecas de presentacion en fagos vease, por ejemplo, Valores del agente prostático 442 2 y Winter,J.

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Una vez que se han obtenido anticuerpos adecuados, estos pueden ensayarse con respecto a actividad, por ejemplo mediante ELISA. En una realizacion alternativa del primer aspecto de la invencion, el resto de union comprende o consiste en un resto de union valores del agente prostático 442 2 de inmunoglobulina, por ejemplo como se describe en Skerra, CurrOpin Biotechnol.

Ago ; 18 4 : En consecuencia, el resto de union presente en el agente de acuerdo con el primer aspecto de la presente invencion se une con especificidad por una proteina kalicreina.

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El experto conoce bien numerosos metodos para evaluar la especificidad de union de una molecula de union por una diana. Por ejemplo, cuando la molecula de union es, o se basa en, un anticuerpo, su capacidad para unirse especificamente con una proteina kalicreina puede evaluarse mediante un inmunoensayo, tal como un ELISA, radioinmunoensayo o similares.

El resto de union como se usa en el primer aspecto de la presente invencion tiene especificidad por una proteina kalicrema valores del agente prostático 442 2.

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Una protema kalicreina humana es una serina proteasa que pertenece a la familia del gen de kalicrema de tejido humano que se ha descubierto que consiste en al menos 15 miembros Hsieh ML, Cancer Res ; 57; Las kalicreinas son glucoproteinas termoestables con una unica cadena polipeptidica, con un PM que varia entre kDa.

Espedficamente, el resto de union como se usa en el primer aspecto de la presente invencion tiene especificidad por la kalicrema valores del agente prostático 442 2 humana hK2. En una realizacion, el resto de union tiene especificidad por PSA. Un aminoacido primario a modo de ejemplo de PSA se proporciona en la Fig.

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En el fluido extracelular PSA puede someterse a degradacion proteolitica, conduciendo de este modo a perdida de activacion y formacion de complejos. En una realizacion preferida, el resto de union tiene especificidad por la isoforma libre es decir, no en complejo de PSA en comparacion con la isoforma en complejo Dietas faciles PSA.

Los restos de union con especificidad por la isoforma libre de PSA pueden tener especificidad de union por un epitopo que se expone en la isoforma libre de PSA, pero no esta expuesto en valores del agente prostático 442 2 isoforma en complejo de PSA, tal como un epitopo conformacional es decir, no lineal.

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Un ejemplo de dicho epitopo conformacional se forma a partir de restos de aminoacidos que son parte del bucle de kalicreina que rodea la hendidura catalitica de PSA, y pueden incluir la triada de sitio activo His41, Asn96 y Ser Vease, Leinonen et al, Clinical Chemistry 12, para analisis y divulgacion adicional de numerosos epitopos adecuados en PSA, que se incorporan en el Adelgazar 40 kilos valores del agente prostático 442 2 por referencia.

Cuando el resto de union valores del agente prostático 442 2 se usa en el primer aspecto de la presente invencion tiene especificidad por PSA, entonces el resto de union puede competir por la union con PSA tal como la isoforma libre de PSAo un peptido que comprende el epitopo reactivo de PSA como se une con el resto de union, con un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en PSA30, 4D4, 5C3 y 5A10, y un fragmento de union a antigeno del mismo.

Puede encontrarse analisis adicional de dichos anticuerpos en Pettersson et al, Clin.

ES2601459T3 - Agentes terapéuticos y usos de los mismos - Google Patents

Chem, valores del agente prostático 442 2, ; Nilsson et al, Brit. Cancer, 6, ; Leinonen et al, Clinical Chemistry 12, ; Vaisanen et al, Anal. Como esta bien establecido en la tecnica, los anticuerpos completos comprenden seis CDR, tres de las cuales estan presentes en la cadena variable ligera Vly las otras tres de las cuales estan presentes en la cadena variable pesada Vh.

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Se conoce bien en la tecnica que tres o menos regiones CDR en algunos casos, incluso una unica CDR o una parte de la misma son capaces de conservar la actividad de union a antigeno del anticuerpo del que derivan las CDR:. Laune et al.

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Nicaise et al. Por ejemplo, en la pagina columna derecha - 3 Nuestra Estrategia para el Diseno se describe un minicuerpo que incluye las regiones hipervariables CDR H1 y H2 intercaladas dentro de regiones marco conservadas.

El minicuerpo se describe como capaz de unirse a una diana.

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QuiochoNature, - es un artfculo de tipo revision adicional que proporcionan un sumario de tecnologfa de minicuerpos es decir, anticuerpos miniaturizados - en este caso con menos de tres CDR. Pessi et alNature, y Bianchi et alJ.

Gao et alJ. Estos documentos se publicaron antes de la fecha de prioridad de la presente solicitud y por lo tanto estarfan disponibles para el experto en la materia cuando implemente la presente valores del agente prostático 442 2.

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Proporcionan claras pruebas de que las moleculas que tienen menos de las seis CDR pueden ser capaces de conservar las propiedades de valores del agente prostático 442 2 a antfgeno de los anticuerpos de los que derivan. Se pretende que el termino hK2 incluya todas las formas isomericas de hK2, y cualquier molecula o protefna en complejo con hK2.

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Una secuencia de hK2 a modo de ejemplo se describe como Transcrito: KLK EnStOoun producto del gen ENSG, como se proporciona en la base de datos de conjunto que puede encontrarse en la siguiente direccion web en:.

La mayorfa de la hK2 hallada en plasma seminal valores del agente prostático 442 2 inactiva y en complejo con inhibidor de protefna C PCI. Tambien puede ser posible que hK2 forme complejos con otros inhibidores de proteasa extracelular.

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En una realization, el resto de union puede tener especificidad por la isoforma libre es decir, no en complejo de hK2 en comparacion con la isoforma en complejo de hK2. Los restos de union con especificidad por la isoforma libre de hK2 pueden tener especificidad de union por un epftopo que se ha expuesto en la isoforma libre de hK2, pero no esta expuesto en la isoforma en complejo de hK2, y este puede ser un epftopo lineal o uno conformacional es decir, no lineal.

Por ejemplo, el resto de union puede tener especificidad por un epftopo que incluye uno o mas restos valores del agente prostático 442 2 aminoacidos que son partes de la hendidura catalftica de hK2 que esta expuesta en hK2 libre y no expuesta en una isoforma en complejo, tal como la forma presente en lfquido seminal Adelgazar 72 kilos hK2 esta valores del agente prostático 442 2 complejo con PCI.

El mapeo epitopico de hK2 se describe en Vaisanen et al, Clinical Chemistry 9,cuyas divulgaciones se incorporan en el presente documento por referencia.

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Cuando el resto de union como se usa en el primer aspecto de la presente invencion tiene especificidad por hK2, entonces el resto de union puede competir por la union por hK2, valores del agente prostático 442 2 un peptido que comprende el valores del agente prostático 442 2 reactivo de hK2 como esta unido por el resto de union, con un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en 11 B6 y 7G1.

Puede encontrarse analisis adicional de dichos anticuerpos en Vaisanen et al, Clinical Chemistry, 9, ; y Vaisanen et al, Anal.

La secuencia de aminoacidos de las cadenas pesadas y ligeras constituyentes del anticuerpo anti-hK2 a modo de ejemplo 11 B6 se muestra posteriormente en la que estan subrayadas las secuencias de CDR. Dicho analisis puede realizarse mediante un ensayo inmunorradiometrico IRMA como se describe en el Ejemplo 9. Cuando el resto de union como se usa en el primer aspecto de la presente invention tiene especificidad por hK2, entonces el resto de union puede comprender una o mas regiones determinantes de complementariedad CDR de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en 11B6 y 7G1 como se muestra por las secuencias subrayadas en las SEQ Adelgazar 50 kilos NO: 10 a 13 anteriores.

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No es necesario que las moleculas de union contengan las seis CDR de cualquiera de estos anticuerpos para conservar la actividad de union de antigeno, aunque en una realization la molecula valores del agente prostático 442 2 union puede comprender las seis CDR de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en 11 B6 y 7G1. Como alternativa, el resto de union puede comprender menos de seis de las CDR, tales como. La presión sobre el tracto gastrointestinal puede producir constipación, tenesmo, heces en forma de cinta y, en ocasiones, diarrea.

El mejor examen físico de la próstata es la palpación rectal a la vez que abdominal; es importante valorar el tamaño, la valores del agente prostático 442 2, que debe ser simétrica, y la ausencia de dolor a la palpación [2]. El estudio radiológico simple latero-lateral y ventrodorsal no tiene un valor diagnóstico demasiado amplio, sin embargo puede ser utilizado para determinar tamaño, forma, contorno y ubicación de la próstata.

La próstata debe encontrarse rodeando a la uretra pelviana, comenzando en el cuello de la vejiga urinaria. Otra prueba de diagnóstico de elevada validez es la evaluación citológica de la tercera fracción del eyaculado.

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Es de elevada importancia que el cultivo bacteriano sea correctamente interpretado, ya que en condiciones normales existe flora normal en valores del agente prostático 442 2 tracto urinario distal. J Natl Cancer Inst 99 10 : J Clin Oncol 12 11 : J Urol 3 : ; discussion Catalona WJ, Basler JW: Return of erections and urinary continence following nerve sparing radical retropubic prostatectomy.

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J Urol 3 : NCI Monogr 7 : J Urol 5 : J Urol 5 : ; discussion N Engl J Med 15 : J Urol 4 : N Engl J Med 4 : Bagshaw MA: External radiation therapy of carcinoma of the valores del agente prostático 442 2. Cancer 45 7 Suppl : Urology 27 1 : Cancer ; 74 : Br J Urol ; 76 : Urology ; 56 : Eur Urol ; 29 : Cancer ; 79 : Urology ; valores del agente prostático 442 2 : Cancer ; 89 : The American Brachytherapy Society recommendations for Permanent prostate brachytherapy postimplant dosimetric analysis.

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American Brachytherapy society ABS recommendations for transperineal permanent brachytherapy of prostate cancer. Med Phys ;26 Dosimetry of interstitial brachytherapy sources: recommendations of the AAPM. Radiation Therapy Committee Task Group n o Med Phys ;22 2. Actas Urol Esp ;—6. Brachytherapy for carcinoma of the prostate: technique, patient selection valores del agente prostático 442 2 clinical outcome.

Seminars in Radiation Oncology ;12 1 — Biochemical outcomes after prostate brachytherapy with five minimal follow up: importance of patient selection and implant quality.

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Prostate-specific antigen bounce after prostate seed implantation for localized prostate cancer: descriptions and implications. Examining the role of neoadyuvant androgen deprivation in patient undergoing prostate brachytherapy. J Clin Oncology ;18 6 — Five-year biochemical outcome following permanent interstitial brachytherapy for clinical t1—t3 prostate cancer.

Role of hormonal therapy in the management of intermediate-to high risk prostate cancer treated with permanent radioactive seed valores del agente prostático 442 2. Does hormonal manipulation in conjuntion with permanent interstitial brachytherapy, with or without supplemental external beam irradiation, improve the biochemical outcome for men with intermediate or high risk prostate cancer? BJU Int ;91 1 —9.

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En el segundo grupo se incluyen los MT con sensibilidad y especificidad bajas en los estadios iniciales, con valores séricos indistinguibles en la mayoría de los casos de los valores del agente prostático 442 2 en sujetos sanos o en pacientes con algunas enfermedades benignas.

Por el contrario, en los estadios avanzados, las concentraciones séricas de estos marcadores permiten asegurar que se trata de un tumor maligno.

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En el tercer grupo, esto es, el de los MT de baja especificidad se incluyen los MT con una sensibilidad dependiente del estadio, pero cuya especificidad es baja, incluso en las fases avanzadas de la enfermedad. Ante la detección de un valor elevado de cualquier valores del agente prostático 442 2, es necesario discriminar si dicha elevación es debida o no a la presencia de un tumor, y para ello se utilizan tres criterios 11 :. La mayoría de los MT no pueden por tanto ser empleados con fines diagnósticos.

Y es precisamente en estas etapas donde los MT son de indudable utilidad y su correcta interpretación ayuda al clínico a la toma de decisiones terapéuticas. En estos casos, para evitar la realización de biopsias innecesarias, se recomienda determinar el PSA libre.

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Es necesario realizar por tanto varias determinaciones seriadas para considerar una elevación significativa. Algunos autores recomiendan, sin embargo, realizar PSA y tacto rectal anual en varones a partir de 50 años.

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Antígeno carcinoembrionario CEA. Puede encontrarse en otras enfermedades malignas y benignas o incluso en pacientes sin enfermedad aparente.

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Se ha establecido una asociación entre la elevación y el estadiaje del tumor. Aproximadamente la tercera parte de los pacientes con recurrencias del CCR presentan elevaciones en las concentraciones de CEA antes de que comiencen a desarrollar sintomatología.

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El uso del tabaco también puede contribuir a elevar los niveles de CEA. Hay que tener precaución en la interpretación de la elevación del marcador durante las primeras 4 a 6 semanas del inicio del tratamiento, ya que pueden producirse elevaciones paradójicas, lo que implica una buena respuesta.

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La elevación de este marcador excluye el diagnóstico de tumor germinal seminoma puro, salvo que exista componente mixto. Gonadotropina coriónica humana HCG.

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La HCG es una glicoproteína compuesta por dos subunidades, la alfa y la beta, que se produce en condiciones normales en el sincitotrofoblasto de la placenta durante el embarazo. Enolasa neuronal específica NSE.

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La NSE es una isoenzima glicolítica neuroespecífica de la enolasa. Se emplea en tumores de origen neuroectodérmico, tales como los carcinomas de pulmón indiferenciados de células pequeñas, los tumores carcinoides intestinales o los neuroblastomas.

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Las muestras de sangre hemolizadas pueden dar falsos positivos puesto que los hematíes son ricos en enolasa. Antígeno a carcinoma de células escamosas SCC.

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El antígeno SCC pertenece a la familia de inhibidores de la serinproteasas. En la tabla 1 exponemos en forma de resumen las características de los principales marcadores tumorales.

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la prostatitis puede causar quemaduras muy fuertes. La presente invencion se refiere en general al campo de los agentes y los metodos terapeuticos, particularmente en el campo del cancer de prostata. La enumeracion o el analisis en la presente memoria descriptiva de un documento aparentemente publicado valores del agente prostático 442 2 anterioridad no deberian tomarse necesariamente como un reconocimiento de que el documento es parte del estado de la tecnica o es valores del agente prostático 442 2 general comun.

El cancer de prostata es en la actualidad la forma mas comun de cancer entre hombres. La prostata es una glandula del tamano de una nuez en los hombres que produce un liquido que es un componente del semen. La prostata tiene dos o mas lobulos, o secciones, encerrados en una capa externa de tejido.

La prostata se localiza en la parte frontal del resto y justo debajo de la vejiga urinaria, y rodea la uretra. La frecuencia de cancer de prostata es mayor en la parte noroeste de Europa y en los Estados Unidos.

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El crecimiento del tumor es habitualmente un proceso que tiene lugar durante un periodo de tiempo prolongado. El cancer de prostata es normalmente una forma de cancer leve.

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De hecho, la mayoria de los hombres a los que se les diagnostica cancer de prostata sobreviven, y solamente una minoria de los hombres se encuentra con valores del agente prostático 442 2 forma mas agresiva del cancer de prostata, que valores del agente prostático 442 2 en un estadio temprano. Esta forma de cancer de prostata solo puede curarse si se diagnostica en un estadio temprano, antes de que el cancer se haya propagado al tejido extracapsular. En la actualidad el diagnostico y la supervision del cancer de prostata pueden realizarse midiendo la concentracion de un antigeno especifico de prostata PSA en la sangre del paciente.

Si la concentracion de PSA es notablemente alta en varias mediciones consecutivas, realizadas en momentos diferentes, la evaluacion es que hay una probabilidad de cancer de prostata.

MÉTODOS: Revisamos en la literatura el valor del PSA como marcador para definir clave, previamente un grupo japonés en (2) descubre la proteína en.

En este momento puede realizarse una biopsia para verificar el cancer de prostata. El PSA tambien conocido como kalicreina III es una proteina, constituida por una unica cadena de aminoacidos, que se produce en las celulas secretoras de la prostata.

Articulos Animales de compañia. Se asocia a machos no castrados o a castrados tratados con andrógenos; los animales afectados tienen de edad media 8 años.

Estas celulas secretoras pueden encontrarse en la glandula prostatica completa. PSA es un marcador bien establecido y exhaustivamente investigado con respecto al cancer de prostata.

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En comparacion con celulas sanas la produccion de PSA es menor en celulas malignas y mayor en celulas hiperplasicas. Es por lo tanto contradictorio que de hecho la concentracion de PSA es mayor en sangre de hombres que padecen cancer de prostata. Sin embargo, una explication puede ser que las celulas malignas tienen una estructura celular deteriorada, y por lo valores del agente prostático 442 2 son mas permeables a PSA.

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Otra serina proteasa importante, que puede ser adecuada para terapia futura del cancer de prostata, es la kalicreina glandular humana 2 hK2. El gen que valores del agente prostático 442 2 hK2 se localiza en el cromosoma 19, junto con el gen que codifica PSA. En la prostata, PSA esta presente como una proforma inactiva y se activa mediante la action peptidasa de hK2.

La investigation inmunohistoquimica con respecto a hK2 ha mostrado que hK2 se expresa en relation con el nivel de diferenciacion. Esto significa que hK2 se expresa en un mayor rendimiento en tejido de baja diferenciacion, tal como tejido sometido a cancer de prostata, y en un menor rendimiento en tejido de alta diferenciacion, tal como tejido sometido a hiperplasia prostatica benigna BPH que es otro problema de prostata comun.

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Las terapias actuales de cancer de prostata son cirugia por ejemplo, prostatectomia radicalradioterapia incluyendo braquiterapia y terapia de radiation de haz externo, ultrasonido focalizado de alta intensidad HIFUquimioterapia, farmacos quimioterapeuticos orales, criocirugia congelation del tumorterapia hormonal tal como terapia antiandrogenoscastration o combinaciones de las anteriores. La mayoria de estas terapias cirugia y radioterapia externa son, sin embargo, solamente o principalmente utiles para el tratamiento de tumores primarios y metastasis grandes.

Son por tanto necesarias modalidades de tratamiento distintas o complementarias para conseguir mejoras considerables de las enfermedades malignas diseminadas, particularmente en casos de micrometastasis.

La terapia, tal como inmunoterapia o radioinmunoterapia, valores del agente prostático 442 2 moleculas de direction tales como anticuerpos y fragmentos podria proporcionar la posibilidad de terapia de enfermedad diseminada.

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Por lo tanto, existe la necesidad de nuevos agentes y metodos terapeuticos para tratar cancer de prostata, particularmente valores del agente prostático 442 2 casos de enfermedad diseminada, metastasis y micrometastasis.

En consecuencia, la presente invencion busca mitigar, aliviar o eliminar una o mas de las deficiencias anteriormente identificadas en la tecnica y desventajas individualmente o en cualquier combinacion y resuelve al menos los problemas mencionados anteriormente proporcionando un metodo de terapia de acuerdo con las reivindicaciones de patente adjuntas.

En un primer aspecto, la presente invencion proporciona un agente que comprende o consiste en a un anticuerpo o un fragmento de union a antigeno del mismo con especificidad por proteina kalicrema humana hK2 y b un resto citotoxico para uso en el tratamiento de cancer de prostata. Dicho de otro modo, el primer aspecto de la presente invencion se refiere al uso de un agente como se ha descrito anteriormente en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de cancer de prostata.

En consecuencia, el primer aspecto tambien proporciona un metodo para el tratamiento de cancer de prostata en un paciente, comprendiendo el metodo la etapa de administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de un agente como valores del agente prostático 442 2 ha descrito anteriormente.

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Por lo tanto, los agentes de la presente invencion comprenden un resto de union en forma valores del agente prostático 442 2 un anticuerpo anti-hK2 o un fragmento de union a antigeno del mismo.

La afinidad de union de los diferentes derivados de anticuerpo mencionados anteriormente puede determinarse con el metodo de Scatchard usando una concentracion fija de fragmento de anticuerpo inmovilizado y diversas concentraciones de indicador de Eu-PSA.

Como alternativa, la afinidad de union puede determinarse usando tecnologia de resonancia de Plasmon Superficial RPS en un instrumento Biacore. Los metodos de analisis se describen adicionalmente en el Ejemplo 8.

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En particular, el fragmento de union a antigeno se selecciona del grupo que consiste en fragmentos Fv por ejemplo, Fv monocatenario y Fv con enlaces disulfurofragmentos de tipo Fab por ejemplo, fragmentos Fab, fragmentos Fab' y fragmentos F ab 2dominios variables individuales por ejemplo, dominios Vh valores del agente prostático 442 2 Vl y anticuerpos de dominios dAb, incluyendo formatos individuales y dobles [es decir, dAb-enlazador-dAb].

Las ventajas de usar fragmentos de anticuerpo, en lugar de anticuerpos completos, son multiples. Ademas, pueden expresarse fragmentos de union a antigeno tales como fragmentos de anticuerpo Fab, Fv, ScFv y dAb en y secretarse de microorganismos, tales como E. Tambien se incluyen dentro del alcance de la invencion versiones modificadas de anticuerpos y fragmentos de union a antigeno de los mismos, por ejemplo, modificados por la union covalente de polietilenglicol u otro polimero adecuado vease posteriormente.

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Se conocen bien en la tecnica metodos para generar anticuerpos y fragmentos de anticuerpo. Por ejemplo, pueden generarse anticuerpos mediante uno cualquiera de varios metodos que emplean induccion de produccion in vivo de moleculas de anticuerpo, exploracion de bibliotecas de inmunoglobulina Orlandi. Estos incluyen, pero sin limitation, la tecnica de hibridoma, la tecnica de hibridoma de linfocitos B humanos, y la tecnica de hibridoma de virus de Epstein-Barr VEB Kohler et al.

Nature ; Kozbor et al. Methods ; Cote et valores del agente prostático 442 2.

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USA ; Cole et al. Por ejemplo, pueden prepararse fragmentos de anticuerpo de acuerdo con la presente invencion mediante hidrolisis proteolitica del anticuerpo o mediante expresion en celulas de E.

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Como alternativa, pueden obtenerse fragmentos de anticuerpo mediante digestion con pepsina o papaina de anticuerpos completos por metodos convencionales.

Se apreciara por expertos en la materia que para terapia humana o diagnostico, pueden usarse anticuerpos humanos o valores del agente prostático 442 2.

Son formas humanizadas de anticuerpos no humanos por ejemplo, murino anticuerpos quimericos modificados por ingenieria genetica o fragmentos de anticuerpo que tienen partes minimas derivadas de anticuerpos no humanos. Los anticuerpos humanizados incluyen anticuerpos en los que se reemplazan regiones determinantes de complementariedad de un anticuerpo humano anticuerpo receptor por restos de una region determinante de complementariedad de una especie no humana anticuerpo donante tal como raton, rata o conejo que tiene la funcionalidad deseada.

En algunos casos, se reemplazan restos de marco conservado de Fv del anticuerpo humano por restos no humanos correspondientes. Los anticuerpos humanizados tambien pueden Adelgazar 40 kilos restos que no se encuentran ni en el anticuerpo receptor ni valores del agente prostático 442 2 las secuencias marco conservadas o de region determinante de complementariedad importadas.

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En valores del agente prostático 442 2, el anticuerpo humanizado comprendera sustancialmente todos de al menos uno, y normalmente dos, dominios variables, en los que todas o sustancialmente todas las regiones determinantes de complementariedad corresponden a las de un anticuerpo no humano y todas, o sustancialmente todas, la regiones marco conservadas corresponden a las de una secuencia consenso humana relevante.

Los anticuerpos humanizados optimamente tambien incluyen al menos una parte de una region constante de anticuerpo, tal como una region Fc, normalmente derivada de un anticuerpo humano vease, por ejemplo, Jones et al.

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Nature ; Riechmann et al. Se conocen bien en la tecnica metodos para humanizar anticuerpos no humanos.

MÉTODOS: Revisamos en la literatura el valor del PSA como marcador para definir clave, previamente un grupo japonés en (2) descubre la proteína en.

En general, el anticuerpo humanizado tiene uno o mas restos de aminoacidos introducidos en el de una fuente que no es humana. Estos restos de aminoacidos no humanos, con frecuencia denominados restos importados, se toman normalmente de un dominio variable importado.

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La humanizacion puede realizarse esencialmente como se ha descrito vease, por ejemplo, Jones et al. Nature ; Verhoeyen et al. En consecuencia, dichos anticuerpos humanizados son anticuerpos quimericos, en los que sustancialmente menos que un dominio variable humano intacto se ha sustituido por la secuencia correspondiente de una especie no humana.

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Valores del agente prostático 442 2 la practica, los anticuerpos humanizados pueden ser normalmente anticuerpos humanos en los que algunos restos de region determinante de complementariedad y posiblemente algunos restos marco conservados se sustituyen por restos de sitios analogos en anticuerpos de roedor.

Los anticuerpos humanos tambien pueden identificarse usando diversas tecnicas conocidas en este campo, incluyendo bibliotecas de presentacion en fagos vease, por ejemplo, Hoogenboom y Winter,J.

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Liss, pp. Una vez que se han obtenido anticuerpos adecuados, estos pueden ensayarse con respecto a actividad, por ejemplo mediante ELISA.

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En una realizacion alternativa del primer aspecto de la invencion, el resto de union comprende o consiste en un resto de union distinto de inmunoglobulina, por ejemplo como se describe en Skerra, CurrOpin Biotechnol. Ago ; 18 4 : En valores del agente prostático 442 2, el resto de union presente en el agente de acuerdo con el primer aspecto de la presente invencion se une con especificidad por una proteina kalicreina.

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El experto conoce bien numerosos metodos para evaluar la especificidad de union de una molecula de union por una diana. Por ejemplo, cuando la molecula de union es, o se basa en, un anticuerpo, su capacidad para unirse especificamente con una proteina kalicreina puede evaluarse mediante un inmunoensayo, tal como un ELISA, radioinmunoensayo o similares. El resto de union como se usa en el primer aspecto de la presente invencion valores del agente prostático 442 2 especificidad por una proteina kalicrema humana.

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Una protema kalicreina humana es una serina proteasa que pertenece a la familia del gen de kalicrema de tejido humano que se ha descubierto que consiste en al menos 15 miembros Hsieh ML, Cancer Res ; 57; Las kalicreinas son glucoproteinas termoestables con una unica cadena polipeptidica, con un PM que varia entre kDa. Espedficamente, el resto de union como se usa en el primer aspecto de la presente invencion tiene especificidad por la kalicrema glandular humana hK2.

En una realizacion, el resto de union valores del agente prostático 442 2 especificidad por PSA.

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Un aminoacido primario a modo de ejemplo de PSA se proporciona en la Fig. En el fluido extracelular PSA puede someterse a degradacion proteolitica, conduciendo de este modo a perdida de activacion y formacion de complejos.

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En una realizacion preferida, el resto de union tiene especificidad por la isoforma libre es decir, no en complejo de PSA en comparacion con la isoforma en complejo de PSA. Los restos de union con especificidad por la isoforma valores del agente prostático 442 2 de PSA pueden tener especificidad de union por un epitopo que se expone en la isoforma libre de PSA, pero no esta expuesto en la isoforma en complejo de PSA, tal como un epitopo conformacional es decir, no lineal.

Un ejemplo de dicho epitopo conformacional se forma a partir de restos de aminoacidos que son parte del valores del agente prostático 442 2 de kalicreina que rodea la hendidura catalitica de PSA, y pueden incluir la triada de sitio activo His41, Asn96 y Ser Vease, Leinonen et al, Clinical Chemistry 12, para analisis y divulgacion adicional de numerosos epitopos adecuados en PSA, que se incorporan en el presente documento por referencia.

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Cuando el resto de union como se usa en el primer aspecto de la presente invencion tiene especificidad por PSA, entonces el resto de union puede competir por la union con PSA tal como la isoforma libre de PSAo un peptido que comprende el epitopo reactivo de PSA como se une con el resto de union, con un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en PSA30, 4D4, 5C3 y 5A10, valores del agente prostático 442 2 un fragmento de union a antigeno del mismo.

Puede encontrarse analisis adicional de dichos anticuerpos en Pettersson et al, Clin. Chem, 10, ; Nilsson et al, Brit.

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Cancer, 6, ; Leinonen et al, Clinical Chemistry 12, ; Valores del agente prostático 442 2 et al, Anal. Como esta bien establecido en la tecnica, los anticuerpos completos comprenden seis CDR, tres de las cuales estan presentes en la cadena variable ligera Vly las otras tres de las cuales estan presentes en la cadena variable pesada Vh.

Se conoce bien en la tecnica que tres o menos regiones CDR en algunos casos, incluso una unica CDR o una parte de la misma son capaces de conservar la actividad de union a antigeno del anticuerpo del que derivan las CDR:. Laune et al.

Monnet et al. Qiu et al. Ladner et al. Heap et al.

MÉTODOS: Revisamos en la literatura el valor del PSA como marcador para definir clave, previamente un grupo japonés en (2) descubre la proteína en.

Nicaise et al. Por ejemplo, en la pagina columna derecha - 3 Nuestra Estrategia para el Diseno se describe un minicuerpo que incluye las regiones hipervariables CDR H1 y H2 intercaladas dentro de regiones marco conservadas.

El minicuerpo se describe como capaz de unirse a una diana. QuiochoNature, - es un artfculo de tipo revision adicional que proporcionan un sumario de tecnologfa de minicuerpos es decir, anticuerpos miniaturizados - en este caso con menos de tres CDR.

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